柱层析就是通常所说的过柱子，又叫柱色谱，属于色谱法中使用广泛的一种方法。


对于含有多种有机物的混合样品，用重结晶无法提纯时， 柱层析法可以说是有机实验中有效的分离手段。


实验室中常用的是以硅胶和氧化铝做固定相的吸附柱。


硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离；


一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附， 整个层析过程即是吸附、 解吸、 再吸附、 再解吸过程。


1.吸附剂的处理及柱子装填：


将一定量薄层层析硅胶装入搪瓷盘置于烘箱中，于105。C活化2H后，取出放置室温即可装柱。


柱子采用干法填充，填满整个柱体，不留死体积；


密封后用柱塞式计量溶剂泵按丙酮一石油醚(5：95)比例泵入溶剂，至溶剂流出止。


2.上样：


将冬凌草的乙醇提取物400G用适量丙酮溶解，泵入中压柱柱头，然后泵入石油醚1000RID。


3.洗脱：


以一定比例的石油醚一丙酮为洗脱液，60ML/MIN的流速进行梯度洗脱，柱的使用压力为2～ 3KG/C 。


按每份500ML收集，TLC检识展开剂丙酮一氯仿(2：8)，显色剂5%香草醛浓硫酸乙醇液


至洗脱完全，相同流份合并，回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。


加入适量甲醇热溶后自然放置，析出结晶，为冬凌草甲素。


4.层析柱再生、平衡：


有效成分经TLC检识全部流出后，用纯丙酮5000ML再生，丙酮一石油醚(5：95)平衡后；


可再次上样，反复使用(使用次数随原料不同而异，一般可连续使用2—6个月以上)。


5.重结晶：


冬凌草甲素结晶析出完全后，减压过滤，然后用少量甲醇洗涤(洗涤液保留，作下次热溶冬凌草甲素用)。


将冬凌草甲素再用适量甲醇热溶后放置，结晶再次析出，待结晶完全后，抽滤，用少量乙醚洗涤；


将结晶室温下晾干后置真空干燥箱中，35度真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。


6.薄层层析分析：


取适量冬凌草甲素对照品及由上述方法得到的冬凌草甲素样品甲醇溶解后点于同一硅胶G薄层板上；


以氯仿一丙酮(8：2)为展开剂进行展开，5% 香草醛浓硫酸乙醇液显色，于105。C烘至斑点清晰。


表明在该展开系统下，冬凌草甲素样品和对照品都具有相同的RF值；


并呈现出同样的蓝绿色斑点，在制备的冬凌草甲素样品中，没有杂质斑痕。

　　

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